小分子RNA分心技术是一种基因组表达地阻断某些基因组传达的研究者技术手段，在、病原传染，遗传病及其它疾病的疗程中均有广泛应用。较慢病原多种形式是一类来源于重组逆转录病原的多种形式，由于具有可以传染非分裂期与分裂期巨噬细胞，可容纳大的外源性目地 基因组片段，免疫反应小等特性，现已成为转到目地 基因组进入灵长类动物巨噬细胞的理想多种形式。将较慢病原多种形式应用于RNA分心当中，可以基因组表达抑制作用灵长类动物的各类巨噬细胞中基因组的传达，成为基因组功能研究者和HIV的有力技术手段。目前研究者表明较慢病原多种形式能在灵长类动物各类巨噬细胞稳固传达siRNA，长期抑制作用基因组传达。为建立巨噬细胞三维后续HIV提供者必需的研究者技术手段。
生博目前为供应商筛选过几百种基因组的分心片断，并通过较慢病原得到几十种稳固巨噬细胞株。为后续研究者HIV提供者了必需依据。
BXXX1基因组分心稳固HeLa巨噬细胞株构建
第一均：BXXX1分心多种形式构建（多种形式pMagic 4.1）
siRNA新设计：
MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6第二均QPCR筛靶实验
Real-time PCR侦测表明： HeLa巨噬细胞中，相对NC组， 四个靶点中，KD2，KD4对目地基因组BXXX1的传达的打碎增稳定性降到80%以上，KD3对目地基因组BXXX1的传达的打碎增稳定性也降到50%以上，都是必需靶点。
第三均Western blot内源验证实验报告
Western Blot侦测结果
混合物说明:
M 为Marker；
1 CON为正常目地自在巨噬细胞（HeLa）混合物；
2 NC为正常目地巨噬细胞（HeLa），加阴性对应病原传染的巨噬细胞混合物（Negative Control）；
3 KD为正常目地巨噬细胞（HeLa），加RNAi靶点病原传染的巨噬细胞混合物（Knock Down）
从Western Blot结果可以看出，KD1，KD2靶点对HeLa巨噬细胞BXXX1的传达有打碎增效果，为必需靶点。
第四均：分心较慢病原KD1.、对应较慢病原CMV-GFP-L.V.传染HeLa巨噬细胞株后筛选稳固株。
HeLa 虹组 White light白光组 Fluoresce 稀释度 Day 3， 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20三、实验总结：
1、HeLa巨噬细胞传染KD1.较慢病原，MOI 10、MOI 20时毒性大，死巨噬细胞多。若只计活巨噬细胞，传染稳定性高，都超过80%。
2、HeLa巨噬细胞传染CMV-GFP-L.V.较慢病原，MOI 10、MOI 20时传染稳定性高，都超过90%。
3、传代培养后，最终筛选出HeLa- KD1 MOI 10稳固株，HeLa- KD1 MOI 20稳固株、HeLa- CMV-GFP MOI 20稳固株。
总编辑： 徐相关新闻
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